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松材線蟲快速檢測儀操作指南

更新時間:2025-12-29瀏覽:14次

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  一、 檢測前準備

  環(huán)境與設備準備

  野外操作選擇陰涼無風處,溫度控制在 15–35℃;實驗室操作需清潔工作臺,避免核酸污染。

  取出檢測儀,開機預熱 10 分鐘,同時檢查電量(續(xù)航需≥2 小時)或外接穩(wěn)定電源。

  耗材與試劑準備

  核對耗材:預制擴增試劑卡、樣本裂解液、一次性研磨管、移液器、濾芯吸頭、無酶離心管。

  試劑復溫:將冷藏的預制試劑卡常溫放置 10 分鐘,避免溫差導致試劑失效;確認裂解液無渾濁、無沉淀。

  準備對照:每批次需設置陰性對照(健康松木樣本)和陽性對照(松材線蟲標準 DNA 樣本)。

松材線蟲快速檢測儀

  二、 樣本前處理(5–10 分鐘)

  取樣:從疑似病木的病健交界處,剪取 1–2g 木屑或木段,放入一次性研磨管。

  裂解釋放核酸

  向研磨管中加入 500μL 裂解液,擰緊蓋子后劇烈震蕩 1 分鐘,或用檢測儀配套超聲模塊處理 30 秒。

  水浴加熱:沸水浴 5 分鐘(野外可用便攜式沸水器),取出后靜置冷卻至室溫。

  上清液制備:10000rpm 離心 1 分鐘(無離心機可靜置 2 分鐘取上清),吸取 100μL 上清液至新的無酶離心管,作為待測樣本液。

  三、 加樣與上機檢測(10–15 分鐘)

  加樣操作

  撕開預制試劑卡封口膜,用移液器吸取 20μL 待測樣本液,緩慢加入試劑卡反應孔中,避免產(chǎn)生氣泡。

  同時向陰性對照、陽性對照的試劑卡中,分別加入 20μL 陰性樣本液、陽性標準液。

  輕彈試劑卡側(cè)壁,確保液體與凍干試劑充分混合,蓋上密封蓋防止污染。

  上機設置

  將試劑卡放入檢測儀卡槽,關閉艙門,在觸屏界面選擇松材線蟲檢測程序。

  設置參數(shù):等溫擴增溫度(LAMP 法 63℃、RPA 法 39℃),反應時間 20 分鐘,點擊 “開始檢測"。

  四、 結(jié)果判讀與數(shù)據(jù)管理(5 分鐘)

  結(jié)果查看

  反應結(jié)束后,檢測儀自動生成檢測結(jié)果:熒光通道法以曲線出現(xiàn)明顯指數(shù)增長為陽性;層析試紙條法以檢測線(T 線)和質(zhì)控線(C 線)雙條帶為陽性,僅 C 線為陰性,無條帶為檢測無效。

  判讀標準:陽性對照需顯陽性、陰性對照需顯陰性,否則本次檢測結(jié)果無效。

  數(shù)據(jù)保存與上傳

  點擊 “保存數(shù)據(jù)",記錄樣本編號、檢測時間、采樣地點等信息;支持藍牙 / 4G 上傳至林業(yè)檢疫平臺。

  導出檢測報告,打印后存檔備案。

  五、 后續(xù)清理與注意事項

  取出試劑卡,按生物安全要求裝入密封袋,帶回實驗室集中處理,禁止野外丟棄。

  用 75% 酒精擦拭檢測儀卡槽與表面,關閉電源;移液器、研磨管等耗材按醫(yī)療廢物處理。

  檢測異常樣本需重復檢測,仍為陽性的需送實驗室用熒光定量 PCR 確證。


 

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